PARP1化学发光检测试剂盒：助力高通量抑制剂筛选与酶动力学研究

PARP1（聚ADP-核糖聚合酶1）是PARP家族中含量最丰富、研究最深入的成员，在DNA损伤修复（DDR）、炎症反应及多种疾病发生发展中发挥关键作用。PARP1通过催化ADP-核糖基化（即向靶蛋白添加ADP-核糖单元）参与DNA单链断裂的修复，其介导的聚ADP-核糖基化（PARylation）可形成线性或分支的ADP-核糖链，进而招募修复因子完成损伤修复。然而，PARP1的异常高表达与乳腺癌、结肠癌、神经母细胞瘤等恶性肿瘤密切相关，其过度激活会促进易错的微同源介导的末端连接（MMEJ）修复途径，导致基因组不稳定性并推动肿瘤演进。此外，PARP1还参与炎症及I型糖尿病的病理过程。基于PARP1的抑制剂已在临床上成功用于BRCA1/BRCA2缺陷型肿瘤的治疗，通过合成致死效应选择性杀伤癌细胞。

为满足科研人员在PARP1酶活性检测、抑制剂筛选及药物发现中的需求，由艾美捷代理BPS Bioscience 公司推出的 PARP1 Chemiluminescent Assay Kit（货号：80551）提供了一套完整、灵敏、高通量兼容的解决方案。该试剂盒以96孔板格式为基础，包含纯化的重组人PARP1酶、反应底物及优化缓冲液，支持100次酶反应，适用于酶动力学研究及小分子抑制剂的筛选与表征。

图1. PARP1化学发光检测试剂盒示意图。

组蛋白被涂覆在96孔板上。接下来，在优化的检测缓冲液中，将生物素化的NAD+混合物（称为PARP底物混合物）与PARP1酶和活化的DNA模板一起孵育。然后，用链霉亲和素-HRP处理板，再加入ELISA ECL底物以产生化学发光，该化学发光可使用化学发光读数仪进行测量。化学发光信号与PARP1活性成正比。

一、试剂盒核心组分与设计优势

1. 即用型组分，操作高效

试剂盒提供所有必需成分：重组PARP1酶（人源）、反应底物（包括组蛋白及NAD?）、PARP检测缓冲液。用户无需额外准备酶或底物，即可直接开展实验。纯化的重组PARP1保留了完整的酶活性，确保检测结果具有高度的生物学相关性。

2. 化学发光检测，灵敏度高

本试剂盒采用化学发光法检测PARP1的酶活性。其原理是将生物素化的底物与链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）结合，通过HRP催化化学发光底物产生稳定、高强度的发光信号。发光强度与PARP1催化的PARylation水平成正比，从而实现对酶活性的精确定量。与荧光法相比，化学发光法不受化合物自发荧光干扰，背景更低，动态范围更宽，尤其适用于含有荧光化合物的筛选实验。

3. 96孔板格式，兼容HTS

试剂盒提供96孔板格式，并可与自动化移液工作站无缝对接，实现高通量筛选（HTS）。用户可在单次实验中完成数十至数百个化合物的初筛，快速识别具有PARP1抑制活性的先导化合物。对于需要更高通量的应用，BPS Bioscience也提供384孔板版本的PARP1检测试剂盒（需另行咨询）。

4. 酶动力学与抑制剂表征双重应用

利用试剂盒中的纯化酶和底物，研究人员可以：

测定酶动力学参数：通过改变底物浓度，计算Km、Vmax等常数，比较不同突变体或不同条件下的催化效率。

计算抑制剂IC50：在固定酶和底物浓度下，加入梯度稀释的待测化合物，拟合剂量-反应曲线，获得半数抑制浓度。

二、技术参数与操作要点

规格与储存

检测格式：化学发光（96孔板）。

物种：人源。

运输温度：-80°C（干冰）。

稳定性：按照指示储存（各组分保存条件详见说明书），试剂盒在收货后6个月内保持最佳性能。

监管状态：仅限研究使用（Research Use Only），不可用于临床诊断。

注意事项

避免反复冻融：PARP1酶对温度敏感，建议收到后分装保存于-80°C，避免多次冻融导致活性下降。

底物兼容性：试剂盒中提供的底物已优化，用户无需额外添加组蛋白或DNA，但需注意不同批次间的活性差异。

阳性对照：建议使用已知PARP1抑制剂（如Olaparib、Rucaparib）作为阳性对照，以验证实验体系的有效性。

三、应用场景与科研价值

1. DNA损伤修复机制研究

PARP1是DNA单链断裂修复的核心因子。利用该试剂盒，研究人员可以定量分析不同细胞裂解液或重组蛋白的PARP1活性，评估基因突变、翻译后修饰或药物处理对酶活的影响，从而深入揭示PARP1在非同源末端连接（NHEJ）、同源重组（HR）及核苷酸切除修复等通路中的调控机制。

2. 抗肿瘤药物高通量筛选

PARP1抑制剂已成功用于BRCA突变型卵巢癌、乳腺癌等的临床治疗。然而，现有抑制剂存在耐药性和毒副作用等问题，亟需开发新一代高效低毒的PARP1抑制剂。本试剂盒支持96/384孔板自动化筛选，可快速评估数千个化合物对PARP1活性的抑制作用，并测定IC50值，加速药物发现进程。

3. 合成致死与联合用药研究

PARP1抑制剂在HR修复缺陷细胞（如BRCA1/2突变）中通过合成致死效应发挥抗肿瘤作用。利用该试剂盒，研究人员可以联合其他靶向药物（如ATR抑制剂、WEE1抑制剂）进行筛选，寻找能够协同增强PARP1抑制剂疗效的组合方案，为克服耐药提供新策略。

4. 炎症与代谢疾病研究

除DNA修复外，PARP1还参与炎症因子表达和胰岛β细胞功能调控。利用该试剂盒，可以评估抗炎药物或代谢调节剂对PARP1活性的影响，为探索PARP1在I型糖尿病、神经退行性疾病中的治疗潜力提供工具。

四、文献参考

Marques M., et al., 2019 Oncogene 38 (12): 2177-2191.