糖尿病模型研究工具：Mouse Insulin ELISA/小鼠胰岛素ELISA试剂盒

ALPCO-Mouse Insulin ELISA/小鼠胰岛素ELISA试剂盒：用于定量测定小鼠血清和血浆中的胰岛素。

艾美捷Mouse Insulin ELISA/小鼠胰岛素ELISA试剂盒（80-INSMS-E01）检测原理：

ALPCO小鼠胰岛素ELISA是一种夹心型免疫分析方法。96孔微孔板被涂覆以特异性胰岛素单克隆抗体。标准品、对照品和样本被加入到微孔板孔中与结合物一起。然后微孔板在室温下放置在微孔板振荡器上，以700-900转每分钟的速度振荡。第一次孵育完成后，孔被洗涤并擦干。接着加入TMB底物，微孔板再次在室温下放置在微孔板振荡器上，以700-900转每分钟的速度振荡。第二次孵育完成后，加入终止液，并在450纳米处用分光光度计测量光密度（OD）。产生的色度强度与样本中的胰岛素量成正比。

所需材料：

- 用于分配高达100微升的精密移液管（带一次性吸头）

- 用于分配高达100微升的重复或多通道移液管

- 用于试剂准备的量筒和移液管

- 用于试剂准备的蒸馏水或去离子水

- 微孔板洗涤器或洗涤瓶

- 能够以700-900转每分钟速度振荡的微孔板振荡器

- 带有450纳米滤光片的微孔板读取器

- 用于样本准备的漩涡混合器

注意事项：

1. 该试剂盒中包含的人血液制品已检测HIV（人类免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）的存在。这些病毒的检测方法不能保证病毒的缺失；因此，所有试剂应被视为潜在感染性。处理和处置应遵循所有适当的国家和地方法规，以处理潜在的生物危害材料。

2. 所有源自动物的材料均为BSE阴性。然而，所有材料应被视为潜在感染性。

3. 避免直接与皮肤接触。

4. 本产品不可内服。

5. 使用本产品时，避免进食、饮水或吸烟。

6. 不要口吸任何试剂。

7. 试剂盒中的试剂是特定批次的，不得替换。

8. 不要使用超过有效期的试剂。

9. 不建议更改测试程序，可能会影响测试结果。

测试程序：

所有试剂和微孔板条应在使用前平衡至室温（18-25°C）。使用前轻轻混合所有试剂。每次运行测试时，如果同时使用多个微孔板，则每个微孔板都必须进行标准曲线测试。所有标准品、对照品和样本应以双份运行。

1. 在打开铝箔袋之前，应将微孔板平衡至室温。为标准品、对照品和样本的双重测定指定足够的微孔板条。剩余的微孔板条应存放在含有干燥剂的密封铝箔袋中，存放在2-8°C。

2. 将每个标准品、对照品和样本的10微升分别滴入相应的孔中。有关对照品重组说明，请参阅试剂准备和分析证书。

3. 向每个孔中滴入75微升的工作强度结合物（见试剂准备）。

4. 用板封盖覆盖微孔板，并在室温下振荡器上以700-900转每分钟的速度振荡，孵育2小时。

5. 倒掉孔中的内容，并使用微孔板洗涤器用每个孔350微升的工作强度洗涤缓冲液洗涤微孔板6次（见试剂准备）。或者，使用配备洗涤喷嘴的洗涤瓶将工作强度洗涤缓冲液注入孔中。（不建议使用多通道移液管。洗涤液必须以足够且相等的力量分配，以便正确洗涤孔。）在洗涤之间，倒置微孔板以丢弃液体，并在吸水纸上用力拍打倒置的微孔板。在最后一次洗涤后（自动或手动），通过倒置并在吸水纸上用力拍打微孔板，从孔中去除任何残留的洗涤缓冲液和气泡。

6. 向每个孔中滴入100微升的TMB底物。

7. 用板封盖覆盖微孔板，并在室温下振荡器上以700-900转每分钟的速度振荡，孵育15分钟。

8. 向每个孔中滴入100微升的终止液，并轻轻摇晃微孔板以混合内容物。在进行下一步之前，去除任何气泡。

9. 将微孔板放入能够读取450纳米处吸光度的微孔板读取器中。微孔板应在加入终止液后立即分析，且不超过30分钟。

结果计算：

从标准品构建标准曲线。将零点作为曲线的一部分。建议使用软件程序计算标准曲线并确定样本的浓度。

ALPCO小鼠胰岛素ELISA是一种配体结合测定，其响应与分析物浓度呈S形关系。目前接受的此类曲线的参考模型使用5参数逻辑（pl）拟合，因为此模型可以在更大范围内优化准确性和精确性。尽管三次样条和其他模型是可以接受的方法，但它们通常在范围的低端和高端显示出较低的内部测试准确性和精确性。

在以下示例中，使用了5 pl曲线拟合来最大化低浓度样本的准确性和精确性。然而，由于个体实验室条件的影响，所有模型的准确性和精确性在可检测范围的最低端和最高端都是有限的。因此，在解释分析物响应变为非线性时的结果时，始终需要谨慎。

不建议将样本浓度值外推至标准浓度值范围之外。

文献参考：

Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.

短期测定方案：