GPX4抑制剂筛选试剂盒：铁死亡通路研究的功能性工具

产品概述

由艾美捷代理Cayman推出的GPX4抑制剂筛选试剂盒（货号：701880）提供了一个稳健、易用的高通量筛选平台，用于发现人源GPX4（谷胱甘肽过氧化物酶4）的新型抑制剂。GPX4是铁死亡（ferroptosis）通路的负调控因子，在抗氧化防御和细胞存活中发挥关键作用。该试剂盒通过偶联酶反应间接测定GPX4活性，并配备阳性对照ML-162，是药物筛选和机制研究的理想工具。

检测原理

GPX4催化谷胱甘肽（GSH）依赖性的氢过氧化物还原反应，生成氧化型谷胱甘肽（GSSG）和水。本试剂盒利用谷胱甘肽还原酶（GR）和NADPH的偶联反应进行检测：

1. GPX4催化氢过氧化物还原，消耗GSH并产生GSSG。

2. GR利用NADPH将GSSG重新还原为GSH，同时将NADPH氧化为NADP?。

3. NADPH在340 nm处有特征性吸收峰，而NADP?无此吸收。

随着反应进行，NADPH被持续消耗，340 nm处的吸光度（A???）呈线性下降。吸光度下降速率与GPX4活性成正比。当加入GPX4抑制剂时，GPX4活性被抑制，NADPH消耗减少，A340下降速率相应降低。通过对比样品孔与对照孔的吸光度变化速率，即可定量评估化合物的抑制效果。

试剂盒中提供的ML-162是一种已知的GPX4抑制剂，用作阳性对照，确保实验体系的有效性。

核心性能参数

参数 规格

检测原理 偶联酶反应（GPX4 + GR），340 nm动力学读数

阳性对照 ML-162（已知GPX4抑制剂）

检测目标 人源GPX4活性

检测模式 吸光度下降速率（连续动力学法）

储存温度 -80°C

运输条件 美国大陆地区干冰运输；其他地区可能不同

同义词与来源

该试剂盒检测的靶点具有以下别名：

Glutathione Peroxidase 4（谷胱甘肽过氧化物酶4）

PhGPx（磷脂氢过氧化物谷胱甘肽过氧化物酶）

Phospholipid Hydroperoxide Glutathione Peroxidase

来源：该试剂盒中的GPX4酶来源于牛。

实验操作要点

动力学读数方法

本试剂盒采用连续动力学检测法，而非终点法。建议在340 nm波长下，于室温或设定温度下连续监测5-10分钟，每30秒读取一次吸光度。通过计算线性区间内的吸光度下降速率（ΔA340/min）来反映GPX4活性。

阳性对照设置

每次实验必须设置含ML-162的抑制对照组，以及不含抑制剂的空白对照（100% GPX4活性）。

关键质控指标

背景孔：不含GPX4的反应体系，用于校正非酶促的NADPH氧化。

线性范围：确保吸光度下降速率在0.005-0.05 ΔA???/min之间，超出范围需调整酶量或样本浓度。

Z’因子：用于评估高通量筛选质量，通常要求Z’ > 0.5。

使用注意事项

所需但未提供物品

请下载试剂盒说明书，确认本检测是否需要超纯水（Milli-Q或等效产品）或其他组件。常见需自备的试剂包括：

NADPH（部分批次提供，需确认）

谷胱甘肽还原酶（GR，部分批次提供）

氢过氧化物底物

96孔或384孔紫外透射微孔板

重要警告

本产品不适用于人类或兽医用途。

特殊储存要求

GPX4对温度敏感，必须储存于-80°C。避免反复冻融，建议分装保存。

阳性对照ML-162储存于-80°C，解冻后应尽快使用。

应用领域

应用场景 说明

铁死亡通路药物筛选 发现靶向GPX4的新型诱导剂，用于癌症治疗（诱导铁死亡）

神经保护研究 筛选GPX4激活剂，用于神经退行性疾病（抑制铁死亡）

缺血再灌注损伤 评估GPX4调节剂在心肌、肾、脑缺血模型中的保护作用

化学生物学探针开发 鉴定选择性GPX4抑制剂的结构-活性关系

耐药机制研究 检测肿瘤细胞中GPX4活性变化与耐药性的关联

技术优势总结

特性 优势

间接偶联法 无需标记底物，利用天然NADPH吸收变化，操作简便

连续动力学监测 实时跟踪酶活性，避免终点法的非线性误差

含阳性对照ML-162 确保实验体系可靠性，便于标准化和跨实验比较

适用于高通量筛选 96/384孔板兼容，自动化读数友好

靶向铁死亡关键节点 GPX4是铁死亡执行阶段的核心调控蛋白，筛选结果直接关联功能表型

结语

Cayman GPX4抑制剂筛选试剂盒通过经典的NADPH偶联酶动力学检测方法，为铁死亡通路研究提供了高效、可靠的抑制剂发现平台。其阳性对照ML-162的引入确保了实验的可控性，而连续动力学读数设计则提升了数据的定量准确性。使用者应严格遵守-80°C储存条件和干冰运输要求，并在实验前仔细阅读说明书确认所需组件。该试剂盒适用于高通量药物筛选、机制验证及化学生物学等多样化研究场景，是GPX4靶向调控研究的标准化工具。