在表观遗传学研究和药物发现领域,甲基转移酶作为重要的治疗靶点,其活性测定方法的开发往往面临巨大挑战。不同甲基转移酶对底物和辅因子的偏好各异,传统方法需要为每个靶点单独开发检测体系,耗时耗力且难以标准化。Transcreener EPIGEN甲基转移酶活性测定试剂盒提供了一套基于SAH通用检测的均相、即混即读解决方案,彻底改变了这一局面。
一、核心原理:SAH转AMP,实现通用检测
本试剂盒的检测原理基于所有甲基转移酶反应的共性——催化甲基从辅因子S-腺苷甲硫氨酸转移至底物,同时产生S-腺苷同型半胱氨酸。通过偶联酶系统将SAH转化为AMP,再利用Transcreener? AMP?/GMP?检测平台进行定量,即可精确反映甲基转移酶活性。
技术流程三步完成:
1. 甲基转移酶反应:酶催化甲基转移,产生SAH。
2. 偶联酶转化:将SAH定量转化为AMP。
3. 荧光检测:AMP与示踪剂竞争结合抗体,产生可量化的荧光信号(FP或TR-FRET格式)。
二、关键优势:专为HTS优化
1. 通用性检测,覆盖所有甲基转移酶
一种检测体系适用于任何甲基转移酶,无论底物是组蛋白、DNA还是小分子,无需为每个靶点单独开发方法,显著缩短了方法开发周期。
2. 宽泛的SAM浓度范围
兼容0.1 ?M至50 ?M的SAM浓度区间,支持生理相关条件下的酶活性测定,避免了高浓度SAM可能带来的底物抑制或偏离生理状态的问题。
3. 卓越的数据质量
在低底物转化率下仍可获得Z' ≥ 0.7的优异数据质量和≥100 mP的偏振位移,满足高通量筛选的统计学要求。低转化率检测同时减少了酶用量,节省了昂贵的重组蛋白成本。
4. 远红外示踪剂,降低干扰
采用远红外荧光示踪剂,有效避开了化合物自发荧光和光散射的干扰,筛选中假阳性率显著降低。
5. 信号稳定性>24小时
试剂和信号稳定性超过24小时,支持自动化工作流程中任意规模的批次处理,无需严格的时间控制。
三、验证与应用
本试剂盒已使用Reaction Biology公司提供的多种纯化甲基转移酶完成验证,涵盖组蛋白甲基转移酶和DNA甲基转移酶等主要类别,性能可靠。
四、总结
Transcreener EPIGEN 甲基转移酶活性测定试剂盒凭借通用性覆盖所有甲基转移酶、宽范围SAM浓度兼容、Z' ≥ 0.7的优异数据质量、远红外读数降低化合物干扰、即混即读HTS兼容五大核心优势,为表观遗传学靶点的药物发现提供了高效、标准化的解决方案,是甲基转移酶抑制剂筛选和研究的理想工具。

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