Transcreener ADP2 荧光偏振检测试剂盒：直接检测ADP产物，彻底规避偶联酶干扰

在激酶药物研发领域，准确、高效地测定激酶活性是化合物筛选和先导物优化的核心环节。传统的激酶检测方法往往依赖偶联酶系统、放射性同位素或底物磷酸化标记，这些方法不仅操作繁琐，还容易引入假阳性干扰，增加方法开发的时间和成本。由艾美捷代理BellBrook推出的Transcreener ADP2 荧光偏振（FP）检测试剂盒（货号：3010-1K）提供了一套基于直接检测ADP产物的均相、即混即读生化检测方案，为激酶抑制剂筛选和先导化合物发现带来全新解决方案。

一、核心原理：直接检测ADP产物，从源头规避干扰

本试剂盒的检测原理基于激酶反应的共性——所有激酶催化ATP磷酸基团转移至底物，同时产生ADP。通过特异性识别并定量反应体系中生成的ADP，即可精确反映激酶活性。

技术核心由两大关键组分构成：

1. ADP选择性抗体：能够高度区分ADP与ATP，特异性结合反应生成的ADP。

2. 远红外荧光示踪剂：与ADP竞争结合抗体。

当激酶催化磷酸转移反应产生ADP时，ADP与示踪剂竞争结合抗体，引起荧光偏振、荧光强度或时间分辨荧光共振能量转移信号的可量化变化。通过检测信号变化即可精确计算ADP生成量，进而测定激酶活性。

与传统方法相比，该技术无需偶联酶、无需放射性底物、无需磷酸化特异性抗体，完全规避了偶联酶体系可能带来的底物竞争和化合物干扰问题。

二、关键优势：从研发到HTS的全链条支撑

1. 直接检测ADP，避免假阳性

传统的激酶检测方法（如偶联酶法）依赖下游酶的连续反应，化合物可能直接抑制偶联酶而产生假阳性结果。本试剂盒通过直接检测ADP产物，消除了这一系统误差，筛选数据的可靠性显著提升。

2. 通用性检测，适用于任何激酶家族

无论靶向酪氨酸激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶还是脂质激酶，无论底物是蛋白、多肽还是小分子，本试剂盒均适用。一种检测体系覆盖所有激酶靶点，彻底简化了方法开发流程，降低了平台切换成本。

3. HTS-ready，鲁棒性优异

兼容96孔、384孔及1536孔板，Z'因子 > 0.7，满足高通量筛选的统计学要求。即混即读的均相模式无需洗涤或分离步骤，与自动化液体工作站无缝对接，可在数小时内完成数千个化合物的筛选。

4. 超高灵敏度，节省酶用量

在低ATP浓度下仍可准确检测ADP积累，对低活性激酶或难以表达纯化的靶点尤为适用。高灵敏度意味着每孔所需酶量大幅降低，有效节约昂贵的重组蛋白成本。

5. 方法学灵活性

既可作为终点法使用，也可通过多时间点取样实现连续监测；不仅适用于激酶，还适用于任何ADP产生的酶促反应体系。

三、应用场景：药物发现全流程

本试剂盒广泛应用于激酶药物发现与开发的多个环节：

化合物库高通量筛选：快速识别目标激酶的新型化学骨架。

先导物优化与构效关系研究：精确测定优化化合物的IC??值。

激酶选择性谱分析：评估候选化合物对多靶点的选择性。

酶学动力学表征：测定K?、V_max、IC??等关键参数。

已发表的成功应用案例包括：

礼来公司：利用该平台发现并申请了Aurora A激酶抑制剂专利，用于癌症治疗开发。

威斯康星大学：通过检测解旋酶活性，筛选出丙型肝炎小分子抑制剂候选物。

辉瑞公司：发现乙酰辅酶A羧化酶抑制剂，为糖尿病和代谢综合征提供潜在治疗方案。

四、检测格式选择指南

试剂盒提供三种荧光检测格式，适配不同实验室设备配置：

检测格式 | 特点 | 推荐应用场景

荧光偏振 (FP) | 操作最简单，仪器普及度高 | 常规活性测定和中等通量筛选

荧光强度 (FI) | 灵敏度高，信号稳定 | 低活性激酶或低转化率条件

TR-FRET | 背景最低，信噪比最优 | 高灵敏度HTS和低丰度样品检测

三种格式均采用相同的核心检测原理和操作流程，可根据实验室现有读板仪配置灵活选择。