MP Biomedicals MagBeads 石蜡包埋样本RNA提取试剂盒（磁珠法）操作步骤

MagBeads FastRNA Kit for FFPE采用高结合力的磁珠，经过裂解和消化，将RNA释放到裂解液中。加入磁珠和Binding Buffer后，RNA被吸附于磁珠表面，蛋白质和其他杂质不会被吸附。Wash Buffer去除多余的杂质，再用乙醇洗去多余盐分，最后用Elution Buffer将RNA洗脱。

作为MP Biomedicals全国总代理，艾美捷科技强烈推荐MP Biomedicals热销产品MagBeads 石蜡包埋样本RNA提取试剂盒（磁珠法）。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

手工提取：

1. 使用手术刀修剪掉样本块上多余的石蜡。切取最多8片（5~20微米厚）切片。注意：如果样本曾暴露于空气中，需丢弃最初的2~3片样本。

2. 向样本管中加入600微升Buffer DPS，涡旋振荡5秒，并短暂离心使溶液集中于管底。

3. 在56℃下孵育3至5分钟，并涡旋振荡5秒以溶解石蜡。注意：Buffer DPS可能会变得浑浊或不透明。如果发生这种情况，需额外加入Buffer DPS并重复此步骤。

4. 以14,000×g离心2分钟，并小心丢弃上清液，避免干扰沉淀物。

5. 向样本中加入150微升Buffer FRL和20微升蛋白酶K，涡旋振荡。在55℃下孵育15分钟。注意：在80℃下孵育可以逆转甲醛修饰的核酸。孵育时间过长会导致RNA降解。

6. 短暂离心1.5毫升管，去除管盖内侧的液滴。加入150微升Buffer AL，立即转移样本至2毫升微量离心管或2毫升96孔样本板（不直接倒出样本）。涡旋振荡5秒，然后在80℃下孵育15分钟。短暂离心样本，然后进入提取步骤。

磁珠操作步骤：

1. 在96孔深孔板的孔中加入20微升磁珠颗粒和300微升异丙醇。用移液器混合10次，并在700~900转/分钟下振荡6分钟。将深孔板放在磁板上，让磁珠聚集5分钟。在磁板上进行吸液操作，丢弃板中的上清液。

2. 加入500微升Buffer MW1，并在900~1200转/分钟下振荡1分钟以重新悬浮磁珠。将试管放在磁架上1分钟，然后移除上清液。将板留在磁分离装置上，等待1分钟。用移液器移除残留液体。将磁珠颗粒额外干燥1分钟。

3. 向样本中加入100微升DNase混合液（100微升DNase缓冲液+10微升DNase I），通过在600~900转/分钟下振荡10~15分钟进行混合。

4. 向样本中加入500微升Buffer MW1，振荡5分钟。将试管放在磁架上1分钟，然后移除上清液。

5. 加入500微升Buffer MW2，并振荡1分钟以重新悬浮磁珠。将试管放在磁架上1分钟，然后移除上清液。

6. 重复步骤5一次。

7. 将板留在磁分离装置上，等待1分钟。用移液器移除残留液体。将磁珠颗粒额外干燥3~5分钟。

8. 向样本中加入30~100微升无RNase水，并通过振荡5分钟进行混合。将试管放在磁架上3分钟。

9. 将含有纯化RNA的清澈上清液转移到新管中，并将RNA在-20℃下保存。

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