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Biogradetech:Sephadex G25

发布者:艾美捷科技    发布时间:2023-08-21     
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Sephadex G25 是以葡聚糖为基质的凝胶过滤层析介质,其工作原理主要是利用具有网状结构的葡聚糖凝胶分子筛作用,根据被分离物质不同分子大小进行分离筛选。层析时,大于凝胶孔径的大分子,被阻于凝胶相外,沿着凝胶颗粒之间的间隙走,下移速度最快,故最先洗脱下来,中分子物质部份进入凝胶内部,洗脱速度为其次,而小分子物质因全部进入凝胶,受到阻力最大,故最后被洗脱下来。Sephadex G25葡聚糖层析介质分离范围为1~5kD(球形蛋白),主要用于多肽的分离以及大分子蛋白质的脱盐和缓冲液替换。   


脱盐介质&脱盐柱

货号名称应用
C-BETB002-100mLSephadex G25, 100mL利用分子筛作用,进行缓冲液交换、脱盐,分离并去除小分子; 工业脱盐。
C-BETB002-10mLSephadex G25, 10mL
C-BETB002-1LSephadex G25, 1L
C-BETB002-250mLSephadex G25, 250mL
C-BETB002-500mLSephadex G25, 500mL
C-BETB002-50mLSephadex G25, 50mL
C-BETB002-5mL-ColumnSephadex G25, 5mL Prepacked Column

备注:按凝胶介质粒径不同,Sephadex G25系列介质可分为四类,分别为:Sephadex G25粗, Sephadex G25中等,Sephadex G25细和 Sephadex G25超细,上表的Sephadex G25属于Sephadex G25(M)中等。  


产品特性

货号名称应用
C-BETB002-100mLSephadex G25, 100mL利用分子筛作用,进行缓冲液交换、脱盐,分离并去除小分子; 工业脱盐。
C-BETB002-10mLSephadex G25, 10mL
C-BETB002-1LSephadex G25, 1L
C-BETB002-250mLSephadex G25, 250mL
C-BETB002-500mLSephadex G25, 500mL
C-BETB002-50mLSephadex G25, 50mL
C-BETB002-5mL-ColumnSephadex G25, 5mL Prepacked Column


层析色谱图如下

Sephadex G25.png


应用实例 

色谱柱:XK16/30脱盐柱,柱床高度25 cm。

平衡缓冲液:20 mM PB+150 mM NaCl pH 7.0,0.45 μm滤膜过滤。

流速:2 mL/min。

柱平衡:将色谱柱连接至纯化仪器,使用平衡缓冲液冲洗脱盐柱 2-3 倍柱体积(Column Volume,以下简称 CV)。

加载样品:某蛋白样品,上样体积为1 mL。为尽可能增加层析柱的使用寿命,样品上样前须进行澄清处理,如 10000 g 离心10min 或0.45um 滤膜过滤。

洗脱:使用平衡缓冲液冲洗脱盐柱 2 CV 以上,使用流速不要超过推荐的最大流速。 


使用方法 

Sephadex G25 系列介质常用于蛋白溶液的脱盐、缓冲液交换和不同分子量蛋白的分离等。 

根据不同的用途其上样量也不尽相同,进行缓冲液置换或脱盐时最高可上样 20%柱体积。

1、 介质溶胀 

以干态供应的 Sephadex G25 系列介质,使用前必须在过量的溶液中充分溶胀,如 10 g 介质溶胀时加入 100-150 mL 水,溶胀 3 h 以上。沸水浴可加速溶胀速度(如 90℃ 1 h 即可),但要避免剧烈搅拌,以防凝胶破碎。

2、 层析柱填装 胶悬液的准备:

计算所需溶胀介质的量(柱床体积为 1 L 时所需 100%沉降胶约为 1.15 kg)。(例如:装填 16/20 柱,柱床高度 10 cm,所需溶胀介质的量为 π×(1.6/2)2×10×1.15=23.11 g 称取 23.11g介质于干净烧杯中,加入一定量(如 12 mL)的装柱溶液,搅拌使其形成均匀的胶悬液。)

装柱: 

1)检查层析柱,确保各部件完整、干净。安装下柱头,拧紧 O 型圈后,将层析柱垂直固 定在铁架台上,用水平仪检查并调整,使层析柱保持水平。 

2)层析柱中加入适量的装柱溶液,以除去柱子中的空气。拧上底部的堵头,柱内保留 1-2 cm高度的装柱溶液。 

3)用玻璃棒紧靠柱内壁引流,将胶悬液连续倒入层析柱中,以减少气泡的产生。介质自然沉降至体积不再变化,此时介质和溶液出现分层,上层溶液完全澄清。 

4)连接上柱头至低压层析系统,开泵以一定流速排出管路中残留的空气,暂停系统,将上柱头安装至层析柱上,柱头下端距离胶面约 1 cm,拧紧 O 型圈,开泵以 300-500 cm/h 流速压柱至柱床体积不再变化,继续压柱 5-10 min,用记号笔标定胶面所在位置。 

5)暂停系统,拧上底部的堵头,使层析柱上端和泵断开,向下转动调节杆,至记号处以 下 0-0.5 cm 停止,拧上上端堵头。装柱完成。

3、 清洗及再生 

在位清洗:为除去变性蛋白、脂蛋白或脂质,需要对介质进行在位清洗。常用的清洗液为 0.2 M NaOH 或非离子型去垢剂,清洗 2-3 CV。

4、 保存条件 

20%乙醇或 0.01 M NaOH,室温保存。   


Biogradetech是全球生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商。他们提供广泛的产品组合,包括细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域的试剂。Biogradetech的产品受到全球生物研究机构和生物制药公司的高度追捧,他们以高质量、可靠性和服务而闻名。    

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