HDAC(组蛋白去乙酰化酶)通过去除组蛋白赖氨酸残基的乙酰基,促使染色质紧缩,抑制基因转录。在肿瘤中,HDAC异常活化导致抑癌基因沉默,驱动细胞恶性转化。例如,乳腺癌中HDAC介导的乙酰化水平降低是表观遗传异常的关键机制。抑制HDAC活性可逆转乙酰化失调,重新激活抑癌基因。目前FDA已批准SAHA、Belinostat等HDAC抑制剂(HDACi)用于肿瘤治疗,超过100种HDACi处于临床研究阶段。因此,有效检测HDAC活性及抑制效果,是开发靶向药物的基石。
一、Epigentek提供的HDAC活性与抑制性联合检测方案:
1. 核蛋白提取试剂盒(货号OP-0002),高效制备无核酸污染的核蛋白提取物
功能:从哺乳动物细胞/组织中高效分离具有完整酶活性的核蛋白,避免核酸干扰。
流程:
预裂解缓冲液破坏细胞膜,裂解缓冲液释放核蛋白。
60分钟内完成提取,提取物直接用于HDAC活性检测。
关键优势:保持HDAC天然构象,确保后续活性检测准确性。
创新比色法原理:
主要步骤1:乙酰化组蛋白底物包被于微孔板,HDAC特异性去乙酰化。
主要步骤2:去乙酰化产物被抗体识别,通过显色反应(450 nm吸光度)定量。
技术优势:
超高灵敏度:专利配方使背景信号降低>80%,可检测低至0.1 ng/μL HDAC。
广泛适用性:支持I-IV类HDAC(含HDAC1-11、SIRT1-7)的活性/抑制分析。
二、HDAC活性/抑制性检测的应用场景:
1. 表观遗传药物开发
抑制剂筛选:快速评估化合物对HDAC的抑制效力(如SAHA类似物的IC~50~测定)。
选择性验证:区分I/II类HDAC亚型,减少脱靶毒性
2. 疾病机制研究
领域 | 应用案例 |
癌症生物学 | 肝癌组织中HDAC活性升高与基因沉默的关联 |
神经科学 | 阿尔茨海默模型脑组织HDAC活性与tau蛋白乙酰化的相关性 |
代谢疾病 | MASLD患者肝细胞HDAC活性与脂质代谢基因的表达调控 |
植物科学 | 水稻OsHDAC1调控根系发育的酶活验证 |
Epigentek的HDAC活性与抑制性检测方案(P-4034 & OP-0002组合)为HDAC研究提供了标准化、高灵敏的检测平台,其应用已覆盖基础机制探索、疾病模型(脂肪肝)和药物研发(新型HDAC抑制剂开发)。随着表观遗传治疗的兴起,该技术将在靶向药物筛选和个体化医疗中发挥更核心的作用。
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