Mabtech：IFN-γ ELISpot、荧光斑点FluoroSpot

ELISpot和FluoroSpot是评估疫苗免疫反应中最常用的免疫分析方法之一。它们以其灵敏度高、操作简便和定量能力强而闻名，已成为疫苗研究中不可或缺的工具，从临床前测试到临床试验都有广泛应用。ELISpot和FluoroSpot分析使研究人员能够通过检测和计数疫苗特异性T细胞和B细胞反应来表征免疫记忆、识别潜在疫苗靶点以及测量免疫反应的持久性。

为什么在疫苗研究中使用ELISpot和FluoroSpot？

ELISpot和FluoroSpot在单细胞水平上识别抗原特异性免疫反应方面具有极高的灵敏度。这使得这两种检测方法对于检测罕见免疫反应至关重要的疫苗研究非常理想。ELISpot和FluoroSpot能够实现：

- 抗原特异性细胞的定量分析

- 多分析物检测（FluoroSpot），用于分析多功能T细胞

- 长期免疫监测

酶联免疫斑点（ELISpot）和荧光斑点（FluoroSpot）检测方法用途广泛，既可以用于检测T细胞的细胞因子分泌，也可以用于分析疫苗接种后抗原特异性B细胞。

基础研究：识别感兴趣的表位和抗原，并研究佐剂配方。利用干扰素γ酶联免疫斑点IFN-γ ELISpot（货号3321-4AST-2，ELISpot Plus: Mouse IFN-γ (ALP)）可以轻松筛选大量的T细胞表位以及测试佐剂的有效性。荧光斑点FluoroSpot（货号FSP-314245-2，FluoroSpot Plus: Mouse IFN-γ/IL-2/TNF-α）可以进一步揭示疫苗是驱动Th1还是Th2反应，以及由此产生的体液反应。B细胞酶联免疫斑点ELISpot（货号3825-2A，ELISpot Flex: Mouse IgG (ALP)）和免疫球蛋白酶联免疫吸附试验ELISA（货号3825-1AD-6，ELISA Flex: Mouse IgG (ALP)）可用于识别抗原特异性B细胞和体液反应。

临床前研究：在动物模型（小鼠、大鼠、非人灵长类动物等）中评估疫苗效力，以测试效力、耐受性、优化剂量、毒性以及期望或不期望的免疫原性。利用荧光斑点FluoroSpot可以从样本中获取更多数据，通过评估反应T细胞分泌的多种细胞因子以及评估早期急性B细胞反应或类别转换以及随后类别转换的IgG+记忆B细胞的发育。

临床试验：监测人类受试群体的免疫反应，以评估期望的免疫原性和效力。同样，为什么不使用FluoroSpot通过评估辅助T细胞极化和高亲和力记忆B细胞的产生来从样本中获得更多的数据？通常会进行纵向采样，以评估免疫反应的发展和持久性。

上市后监测：持续进行免疫监测，以评估持久的免疫反应、是否需要加强针以及T细胞和B细胞的免疫记忆，可采用酶联免疫斑点ELISpot或荧光斑点FluoroSpot。

监测疫苗特异性T细胞

在疫苗研究中，细胞免疫以及高亲和力、中和性抗体的生成通常是评估的主要结果。T细胞酶联免疫斑点ELISpot和荧光斑点FluoroSpot检测方法可以检测到由疫苗衍生肽刺激产生的细胞因子，如干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）和肿瘤坏死因子α（TNF-α），从而提供有关T细胞反应的强度及其功能的见解。使用荧光斑点（FluoroSpot）来表征多功能T细胞，可以进一步深入了解疫苗反应以及哪些T细胞表型被激活。Mabtech甚至设计了一种非常适合评估疫苗诱导的T细胞反应的荧光斑点试剂盒：荧光斑点Path：人免疫监测（3色）,货号FSP-010209-TD-2。

示例：COVID-19疫苗研究

在COVID-19大流行期间，酶联免疫斑点ELISpot和荧光斑点FluoroSpot被广泛用于评估对SARS-CoV-2的T细胞反应。有研究人员使用了荧光斑点Flex：人干扰素γ/肿瘤坏死因子α/白细胞介素2/颗粒酶B检测试剂盒，分析了对SARS-CoV-2变异株的反应，发现三剂mRNA疫苗提供了增强的T细胞反应性，即使是对奥密克戎等变异株也是如此。

荧光斑点Path：SARS-CoV-2（S1scan+SNMO）人干扰素γ/白细胞介素2，货号FSP-0102-P1-1，已在多篇文献中被用于计算疫苗接种或感染后针对SARS-CoV-2特异性的T细胞。该试剂盒不仅包含所有所需的荧光斑点试剂，还包括经过验证的、特别设计的肽段池，这些肽段池已在真实的疫苗接种和感染患者样本上进行了验证。

监测疫苗特异性B细胞

通过酶联免疫斑点ELISpot和荧光斑点FluoroSpot分析B细胞反应，可以检测和计数针对疫苗抗原的抗体分泌细胞。这对于病毒疫苗尤为重要，因为体液免疫在其中发挥着关键作用。这些检测方法可以定量检测记忆B细胞和浆母细胞，从而全面了解早期和后期的体液免疫反应。

示例：流感疫苗和COVID-19疫苗

流感疫苗的研究表明，酶联免疫斑点ELISpot是检测长期存活的记忆B细胞反应的敏感方法，可能比单独检测抗体滴度更为可靠。同样，在COVID-19疫苗的研究中，酶联免疫斑点（ELISpot）检测方法被用于分析长期记忆B细胞反应，这对于理解防止再次感染的免疫反应至关重要。

疫苗研究领域：

流感疫苗：流感疫苗对于控制季节性流感爆发以及预防易感人群的严重疾病至关重要。酶联免疫斑点ELISpot和荧光斑点FluoroSpot检测方法经常被用于流感疫苗的开发，以评估T细胞和B细胞的反应。通过检测干扰素γ（IFN-γ）和白细胞介素2（IL-2）等细胞因子，酶联免疫斑点ELISpot和荧光斑点FluoroSpot能够提供有关疫苗接种或感染后T细胞激活的详细信息。荧光斑点FluoroSpot可以同时评估多种细胞因子反应，捕捉到T细胞对流感抗原（如血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA））反应的全部功能范围。2014年的一项研究甚至表明，与流式细胞术方法相比，荧光斑点FluoroSpot在评估流感特异性反应方面具有更高的灵敏度。对于B细胞反应，荧光斑点FluoroSpot可以检测流感特异性的抗体分泌细胞（ASCs），从而深入了解体液免疫以及保护性抗体的生成。这些工具在研究季节性疫苗与实验性通用流感疫苗的免疫反应方面特别有用，通用流感疫苗旨在诱导更广泛和更持久的免疫反应。这些检测方法帮助研究人员优化疫苗配方和佐剂，跟踪免疫反应随时间的变化，并识别保护相关的因素，从而支持更有效流感疫苗的开发。

疟疾疫苗：疟疾疫苗的开发一直充满挑战，尤其是在疟疾发病率较低的地区，自然获得的免疫力非常有限。酶联免疫斑点ELISpot和荧光斑点FluoroSpot检测方法已成为评估疟疾特异性T细胞和B细胞反应的必要工具。这些检测方法被用于检测对关键疟疾抗原的反应，例如环子孢子蛋白（CSP）和疟原虫表面蛋白1（MSP1），这些抗原通常用于包含辐照子孢子或重组蛋白的实验性疫苗中。酶联免疫斑点ELISpot的高灵敏度使其能够检测到频率较低的抗原特异性反应，这使其成为评估临床试验中疫苗效力以及在疟疾自然暴露率较低的人群中评估疫苗效力的宝贵工具。

SARS-CoV-2 疫苗：正如以上提到的，在 COVID-19 大流行期间，酶联免疫斑点ELISpot和荧光斑点FluoroSpot在快速开发针对 SARS-CoV-2 的疫苗中发挥了关键作用。即使在今天，这些检测方法仍在用于评估这些疫苗诱导的免疫记忆的持久性以及它们对新出现的变体的有效性。

结核病疫苗：结核病仍然是一个重大的全球健康挑战，需要一种能够产生持久免疫力的有效疫苗。酶联免疫斑点ELISpot和荧光斑点FluoroSpot检测方法在结核病疫苗研究中发挥了关键作用，为T细胞反应提供了详细的见解。特别是荧光斑点FluoroSpot检测方法可以同时检测多种细胞因子，如干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素2（IL-2），这些细胞因子与对抗结核分枝杆菌的保护性免疫有关。通过分析多功能T细胞反应，研究人员可以更好地了解与病原体负荷减少相关的免疫机制，最终有助于开发更有效的结核病疫苗，这些疫苗能够激发强大且持久的免疫反应。