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AAT——全套线粒体研究工具,帮你“一网打尽”!

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-06-28     
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线粒体是存在于所有真核细胞中的独特的膜结合细胞器,作为ATP生产和细胞能量供应的主要场所,线粒体的独特方面(包括称为mDNA的单独遗传物质,其自身的蛋白质合成机制以及严格调节的膜电位梯度)使其成为重要的研究课题,另外,随着衰老过程和更多其他人类疾病方面的研究发现,线粒体的作用比以往更加值得我们研究。

 

这期主要给大家带来线粒体荧光探针(活细胞和固定细胞),线粒体膜电位探针,ATP检测,线粒体自噬检测,线粒体通透性转换孔(MPTP)检测相关工具。

 

一.细胞线粒体染料

 

1. 用于标记活细胞线粒体的可用MitoLite?染料

产品名称样品类型可固定Ex
(nm)
Em
(nm)
滤光
片组
规格货号对应试剂盒
MitoLite?蓝色FX490活细胞344469DAPI500 tests2267422665
MitoLite?绿色FM活细胞不行508528FITC10x50ug22695--
MitoLite?绿色EX488活细胞不行508528FITC500 tests2267522666
MitoLite?橙色EX405活细胞不行425522FITC500 tests2267922673
MitoLite?橙色FX570活细胞553576TRITC500 tests2267622667
MitoLite?Red FX600活细胞580598TRITC500 tests22677--
MitoLite?红色CMXRos活细胞579599TRITC10x50ug2269822668
MitoLite?深红色FX660活细胞640659Cy5500 tests2267822669
MitoLite?NIR FX690活细胞658691Cy5500 tests2269022670

 

2. CytoFix?红色固定线粒体染色

CytoFix?Red线粒体染色剂增强的细胞维持能力可使线粒体局部荧光得到保持,即使固定过程中线粒体膜电位丧失后也可以保留。该染料产生的荧光信号在溶酶体中得到很好的保留,使其便于长期跟踪线粒体。CytoFix?红色线粒体染色剂可与GFP表达的细胞,其他荧光偶联物和其他细胞器染色剂一起使用,进行多色分析。它既可用于悬浮细胞,也可用于贴壁细胞,并易于适应各种荧光平台。

 

CytoFix?Red适用于固定细胞线粒体染色

产品名称样品类型可固定Ex(nm)Em(nm)滤光片规格货号
CytoFix?红色线粒体染色活细胞540590Cy3 / TRITC500 tests23200

 

二.线粒体膜电位:


1. JC-10?双发射膜电位(ΔΨm)探针

 

JC-10?是JC-1的衍生物,是电位依赖性探针,用于通过流式细胞仪,荧光显微镜和基于微孔板的荧光测定法确定ΔΨm。在健康细胞中,JC-10?选择性地聚集在线粒体中,生成橙色的JC聚集体,该聚集体在590 nm处显示出较宽的激发光谱和最大发射。然而,在具有低ΔΨm的凋亡和坏死细胞中,JC-10?从线粒体中扩散出来,并生成JC-10?单体,导致向绿色发射(525 nm)处转移。JC-10?允许以定性和定量方式来可视化ΔΨm的变化,分别考虑从橙色到绿色的荧光发射和荧光强度比的变化。它已成功用作多种样本类型的ΔΨm指示剂,包括肌细胞,神经元等。

 

JC-10?的特点:

  • 易于使用:稀释到水性缓冲液中时,JC-10?不会沉淀,从而消除了伪影。

  • 坚固:JC-10?由于在水性介质中的溶解度提高和灵敏度更高,因此测定偏差较小。

  • 增强的信号:JC-10?具有比JC-1高的信噪比。

  • 增强的灵敏度:在所有测试的细胞系中,JC-10?能够比JC-1更好地检测到ΔΨm损失的细微变化。

  • 广泛的应用:JC-10?可用于原代大鼠肝细胞检测

  • 方便:JC-10?与荧光酶标仪,细胞成像仪和流式细胞仪兼容。

 

线粒体膜电位变化.jpg

图3.用JC-10?(货号22204)和JC-1(货号22200)在Jurkat细胞中测定了喜树碱诱导的线粒体膜电位变化。将Jurkat细胞用喜树碱(10 ?M)处理4小时后,将JC-1和JC-10?染料加载溶液添加到孔中,并孵育30分钟。使用NOVOstar酶标仪(BMG Labtech)在Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm下测量了JC-1和JC-10?的J聚集体和单体形式的荧光强度。

 

JC-10?和JC-1双发射线粒体膜电位探针

探针名称Ex/EmEx/Em滤光片组规格货号
JC-10?*替代JC-1 *508/524
(单体)
508/570
(聚合体)
FITC(单体)
TRITC(聚合体)
5x100ul22204
JC-1515/530
(单体)
515/590
(聚合体)
FITC(单体)
TRITC(聚合体)
5mg22200
JC-1515/530
(单体)
515/590
(聚合体)
FITC(单体)
TRITC(聚合体)
50mg22201

 

2. 线粒体选择性罗丹明酯

细胞渗透性阳离子罗丹明,例如TMRE和TMRM,很容易被活性线粒体隔离,通常用于标记活细胞中的线粒体。像JC-10?一样,线粒体中TMRE和TMRM的吸收是由线粒体膜电位驱动的。两种染料都已成功用于动态和原位定量检测,用于筛选线粒体通透性转换孔的抑制剂,评估活细胞中线粒体的功能,并可用于区分活的和死的细胞群,这些电位染料表现出最小的自发淬灭性,低细胞毒性和合理的光稳定性,它们的荧光强度可以用流式细胞仪或荧光显微镜进行测量。与TMRM相比,TMRE的疏水性略强。

 

用于测量线粒体膜电位的电位染料

探测名称Ex(nm)Em(nm)滤光片组规格货号
TMRE [四甲基罗丹明乙酯] * CAS#:115532-52-0 *552574TRITC25mg22220
TMRM [四甲基罗丹明甲酯] * CAS#:115532-50-8 *552574TRITC25mg22221

 

三.ATP测定

三磷酸腺苷(ATP)是一种复杂的有机分子,参与细胞的能量生成,代谢调节和细胞信号传导。它作为主要能源存在于所有活生物体中,并在没有活生物体的情况下迅速降解。因此,ATP测定是一种有用的工具,可用于各种研究应用程序中,以鉴定活生物体的存在。常见的应用包括细胞活力和细胞毒性,表面细菌的检测,水中细菌的定量,培养中的体细胞以及食品质量和污染测试。

 

我们的PhosphoWorks?发光ATP分析提供了一种快速,简单且均一的生物发光方法,可用于通过ATP检测确定哺乳动物细胞的细胞活力,细胞毒性和增殖。

 

用于测量ATP活性,以及生成或消耗

产品名称Ex / Abs(nm)Em(nm)微孔板类型规格货号
PhosphoWorks?荧光ATP检测试剂盒540590黑色100 tests21620
PhosphoWorks?比色ATP检测试剂盒570--透明底100 tests21617
PhosphoWorks?发光ATP分析试剂盒*亮光*----白色1板21610
PhosphoWorks?发光ATP分析试剂盒*亮光*----白色10板21621

四.线粒体自噬:

 

线粒体自噬主要是由去极化线粒体的积累引起的。线粒体作为消除系统,消除了由氧化应激和DNA损伤引起的功能异常的线粒体,导致螯合成自噬体,然后与溶酶体融合并发生降解。

产品名称货号Ex/Em(nm)
Cell Meter 线粒体自噬荧光成像试剂盒22998510/580

 

五.线粒体通透性转换孔(MPTP):

 

线粒体通透性转换孔(MPT孔或MPTP)是由线粒体内膜和内层膜的组分形成的非特异性通道,可能参与细胞凋亡过程中线粒体组分的释放。在健康细胞中,MPTP在打开和关闭状态之间转换,但在细胞死亡期间,MPTP会极大地改变线粒体的通透性。细胞色素c的释放和线粒体膜电位的丢失发生在连续的孔活化之后。

 

产品名称货号规格
线粒体通透性转化孔(mPTP)检测试剂盒K239100 tests

 

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