PBL：VeriKine高灵敏度人干扰素β血清ELISA（货号41415）

人类 I 型干扰素包括多个成员，如 IFN-α (干扰素α)、IFN-β (干扰素β)、IFN-κ (干扰素κ)、IFN-ε (干扰素ε) 和 IFN-ω (干扰素ω) 链?。IFN-β 是一种由成纤维细胞产生的细胞因子，在调节免疫反应和防御细菌、病毒和肿瘤等病原体方面起着至关重要的作用?。IFN-β 对 I 型干扰素受体 (IFNAR) 具有高亲和力，该受体由 IFN-α 受体 1 (IFNAR1) 和 IFN-α 受体 2 (IFNAR2) 链组成?。重组 IFN-β 仍然是治疗多发性硬化症 (MS) 患者的关键疗法。多发性硬化症是一种影响中枢神经系统 (CNS) 的自身免疫性疾病，该疗法可降低复发频率?。准确和精确定量 IFN-β 对于进一步了解其在适应性免疫中的作用以及开发针对自身免疫性疾病和其他疾病的新疗法具有重要意义。

以干扰素过度产生为特征的疾病

pbl的VeriKine高灵敏度人干扰素β血清ELISA（货号41415）能够准确定量复杂生物样本（包括自身免疫血清、正常血清/血浆和组织培养基 (TCM)）中低至 pg/ml 水平的人 IFN-β。该 ELISA 的检测范围为 1.2-150 pg/ml，定量下限 (LLOQ) 为 1.2 pg/ml。IFN-β 与包被在板上的捕获抗体结合，并通过生物素化的二抗进行检测，随后使用与辣根过氧化物酶 (HRP) 偶联的链霉亲和素。四甲基联苯胺 (TMB) 用作底物。

进行了多项研究以评估该试剂盒的稳健性、灵敏度和准确性。

使用方案 A 测量了正常人血清 (NHS)、多发性硬化症 (MS) 患者血清和人血浆中的 IFN-β 浓度，该方案旨在提高血清样本中的性能。NHS、MS 患者血清和使用不同抗凝剂（乙二胺四乙酸二钠、肝素钠、柠檬酸钠）的血浆采集自 Bioreclamation (BioIVT) 和科德角临床研究中心。试剂盒内提供了哺乳动物来源的人 IFN-β 标准品。所有标准品和加标样本均由哺乳动物细胞表达的 IFN-β1a 组成。

结果

图 1. 不同基质中的典型标准曲线。 在正常人血清 (NHS)、组织培养基 (TCM) 和标准品稀释液 (SD) 中制备了人 IFN-β ELISA 标准曲线。上图显示了在多个板子上进行的 8 次标准稀释液和 NHS 中运行的平均值，以及 4 次 TCM 中运行的平均值。误差线表示平均值的标准偏差。

图 2. 正常人血清 (NHS) 中的加标回收率。 上图描绘了使用一个低背景批次的 NHS 在多个板子上进行的 8 次运行的平均值。测试了三个目标 IFN-β 加标水平：高 (100 pg/ml)、中 (20 pg/ml) 和低 (4 pg/ml)。加标浓度根据在标准稀释液中制备的标准曲线计算得出。IFN-β 的测量准确度在预期值的 +/- 20% 以内。误差线表示平均值的标准误。

图 5. 批次间一致性。 评估了 8 个不同批次的 41415 人 IFN-β 标准品标准曲线，并与最近一批 41415 (L-6966) 进行了比较。过期试剂盒批次（以斜体和星号 (\*) 表示）作为持续稳定性研究的一部分进行了测试。L-6790 和 L-6672 在过期后一年内测试，L-6428 和 L-6530 在过期后一年测试，L-6277 在过期后两年测试。IFN-β 的检测准确度在计算平均浓度的 +/- 20% 以内。误差线表示两次运行之间的标准偏差。除 150 和 1.17 pg/ml 浓度外，所有浓度均运行两次。

图 6. 正常人血清 (NHS) 中的稀释线性。 使用一个低背景人血清批次制备了 5 份独立的 80 pg/ml 加标样本。在标准稀释液中对加标样本进行了五次两倍系列稀释。加标样本在 3 个不同的日期进行了测试。不同稀释度加标样本的浓度根据标准稀释液中的标准曲线计算得出。IFN-β 的检测准确度在预期值的 +/- 20% 以内，但一次运行中的单个稀释度除外。

图 7. 多发性硬化症 (MS) 样本中的稀释线性。 在 4 个不同的 IFN-β 阳性血清样本（来自接受 IFN-β 治疗的个体 MS 患者）中测试了检测的线性。所有样本先前均经过 IFN-β 检测。除样本 6276 (±) 运行了两次外，所有样本均在单次实验中运行。每个血清样本在标准稀释液中进行了五次或六次两倍系列稀释。IFN-β 的浓度根据标准稀释液中的标准曲线计算得出。IFN-β 的检测准确度在标称值的 +/- 20% 以内。稀释的标称浓度基于原液样本中测得的值。

图 8. 正常人血清 (NHS) 和多发性硬化症 (MS) 患者血清中定量到的 IFN-β 水平。 检测了 43 份 MS 血清样本和 15 份 NHS 样本中的 IFN-β。23 名 MS 患者接受 IFN-β 治疗，20 名接受其他疗法。在接受 IFN-β 治疗的 23 名 MS 患者中，2 名使用 Betaseron (Beta 1b)，其余 21 名使用 Rebif 和 Avonex (Beta 1a)。在接受 IFN-β 治疗的 MS 患者中，87% 的患者可定量检测到 IFN-β，而在接受其他疗法的患者中，这一比例为 5%。所有低于 LLOQ 的样本在图中均以 1.0 pg/ml 的水平标绘。

总结

PBL 的VeriKine高灵敏度人干扰素β血清ELISA（货号41415）在自身免疫血清、正常血清、组织培养基（补充有 10% FBS 的 DMEM）以及含有抗凝剂乙二胺四乙酸二钠、肝素钠或柠檬酸钠的血浆中表现良好。该 ELISA 可准确定量自身免疫血清中低至约 1.2 pg/ml 的 IFN-β 1a。在生物分析研究中，可以评估这些基质中未知浓度的 IFN-β（在检测范围内）。

对旧批次和近期批次试剂盒的重复测试揭示了该 ELISA 的稳健性、灵敏度以及批次间的一致性。

可溶性 IFNAR2 (sIFNAR2) 不影响 IFN-β 的检测。41415 ELISA 似乎能够检测血清中与 sIFNAR2 结合的 IFN-β 以及游离的 IFN-β。

一项持续进行的稳定性研究表明，人 IFN-β 标准品随时间保持稳定，可用于多个批次中准确测量 IFN-β。

人 IFN-β ELISA 在正常人血清 (NHS) 和自身免疫血清（如来自 MS 患者的血清）中均表现出良好的稀释线性性能。该检测在复杂基质中的多个稀释水平上提供精确的结果。

参考文献

1. Piehler, J., Thomas, C., Garcia, K. C., & Schreiber, G. (2012). Structural and dynamic determinants of type I interferon receptor assembly and their functional interpretation. Immunological reviews, 250(1), 317-34.

2. Hunt, M. & Hunt, R. (2018). Interferon. [online] Available at: http://www.microbiologybook.org/mhunt/interferon.htm.

3. Kasper, L. and Reder, A. (2014). Immunomodulatory activity of interferon-beta. Annals of Clinical and Translational Neurology, 1(8), pp.622-631.