3Helix：荧光F-CHP

CHP在三维胶原培养中展示了癌细胞蛋白酶水解引起的细胞周基质转换过程，而不需要使用合成荧光基质和基因修饰细胞。CHP可以在分子水平上检测和定位胶原组织的机械损伤。CHP还可以用于评估脱细胞胞外基质的胶原损伤。CHP可在SDS-PAGE凝胶中特异性地显示胶原条带，而无需进行western转印。

CHP通过与SDS变性的胶原链进行三螺旋杂交，并在电泳过程中加热，从而实现对SDS-PAGE凝胶中胶原带的简便、敏感和特异性检测^[1]。简单的程序消除了对western blot的需要(例如，蛋白质转移到膜和阻断)，节省了时间，精力和材料。

荧光F-CHP直接在SDS-PAGE凝胶中可靠地测量I型胶原蛋白的稀释系列，并检测到含有少至5ng蛋白质的条带(左)。CHP可识别多种胶原类型(中)，由于其中性和亲水性，对ECM(中)和细胞裂解液(右)中的非胶原分子没有亲和力。

用 Typhoon Imager 荧光成像记录(λex: 488 nm). 图片参考文献^[1] .

此外，CHP可用于替代不成功的胶原抗体或常规胶原染色检测高度变性组织中的胶原蛋白^[1]。 下图显示了完全加热的猪韧带切片中完整的胶原含量，通过F-CHP或B-CHP可见(进一步通过酶标NeutrAvidin检测)。CHP染色对胶原蛋白的特异性比传统的胶原蛋白染色(如Sirus Red)更高，后者依赖于胶原蛋白结合的正电荷，可以对其他碱性氨基酸含量高的蛋白质进行非特异性染色^[2]。

Reference

1.Direct detection of collagenous proteins by fluorescently labeled collagen mimetic peptides. Bioconjugate Chemistry(2013) 

2.Sirius red and acid fuchsin staining mechanisms. Biotechnic & Histochemistry (1998) 73, 71–77.

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