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Assay Genie:脂肪酸摄取试剂盒

发布者:艾美捷科技    发布时间:2023-09-26     
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脂肪酸(fatty acid,FA)是植物、动物和微生物体内脂质(溶于脂肪的生物体内组分)的重要成分。一般而言,脂肪酸由一条含有偶数个碳原子的直链组成,链的一端有氢原子,另一端有羧基(-COOH),正是这个羧基使其成为酸(羧酸)。如果碳与碳之间的键都是单键,脂肪酸就是饱和的,如果其中任何一个键是双键或三键,脂肪酸就是不饱和的。在自然界中脂肪酸不以游离状态存在,通常它们与甘油结合形成甘油三酰的形式存在。脂肪酸是心脏和骨骼肌中用于维持收缩功能的主要燃料来源。为了满足机体的能量需求,脂肪酸的摄取和β-氧化必须协调调节,以确保线粒体β-氧化有足够但不过量的供应。  


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图1.位于线粒体外膜上的CPT1和位于线粒体内膜上的CPT2在将长链脂肪酸以酰基辅酶A形式运输到线粒体基质中的作用示意图 


脂肪酸摄取

长链脂肪酸(LCFA)作为β-氧化的底物是动物重要的燃料来源,是许多不同细胞结构的基石。长链未酯化脂肪酸(LCFA)通过膜转运蛋白(CD36、FABP等)转运到细胞中,细胞中LCFA水平升高在糖尿病、肥胖相关疾病、心血管疾病和某些形式的癌症中很常见。因此,脂肪酸摄取是代谢性疾病治疗的重要靶点,也是代谢研究的重要课题。Assay Genie的基于细胞的脂肪酸摄取检测试剂盒(cat#BA0184)利用荧光脂肪酸类似物,该类似物被脂肪酸转运蛋白摄取并在细胞内积累。加入荧光猝灭试剂以阻断培养基中细胞外的荧光信号。细胞摄取脂肪酸类似物,通过检测λex/em = 488/523nm处荧光信号的增加评估细胞中的脂肪酸摄取活性,并进行激活剂和抑制剂的筛选。

货号BA0184
名称Fatty Acid Uptake Assay Kit 脂肪酸摄取试剂盒
规格100 Tests
样本脂肪细胞和其他脂肪酸转运细胞
应用① 全细胞长链脂肪酸摄取的测定。 ② 评价配体或药物对脂肪酸运输的影响。
优势安全:非放射性测定。 快速和敏感:同质“添加-读取”试验。无需洗涤,裂解或染色步骤。 简单方便:可以自动作为高通量分析脂肪酸运输和调节筛选细胞。

 

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图2. 3T3-L1细胞脂肪酸摄取测定:将3T3-L1细胞以每孔60,000个细胞的密度接种,并进行饥饿处理。左上方:在无胰岛素和存在160 nM胰岛素以及30 μM竞争剂2-溴棕榈酸酯的情况下,3T3-L1细胞的分化和未分化活性。右上方:3T3-L1脂肪细胞对胰岛素的脂肪酸摄取增加。左下方:2-溴棕榈酸酯的脂肪酸转运抑制曲线。抑制剂与工作试剂一起加入,而不是在30分钟的预孵育期间加入。右下方:槲皮素的脂肪酸转运抑制曲线。抑制剂在运行前孵育30分钟。 


脂肪酸氧化

脂肪酸氧化(Fatty Acid Oxidation,FAO)是肉碱棕榈酰转移酶 1和2(CPT1和CPT2)将长链脂肪酸转运到线粒体基质后经羟酰基辅酶a氧化为乙酰辅酶a、NADH和FADH2并生成能量的过程,脂肪酸氧化分为四步: 

1)酰基辅酶A脱氢酶催化脱氢反应。

2)烯酰辅酶A水合酶催化水合作用,通过双键添加水。 

3)3-羟酰基-辅酶A脱氢酶催化脱氢反应,产生NADH。 

4)β-酮硫解酶催化硫酯裂解,裂解末端乙酰基辅酶A基团并形成新的酰基辅酶 A,新酰基辅酶A比原酰基辅酶A短两个碳原子。 

脂肪酸β-氧化系统在人类中的重要性通过一组称为脂肪酸氧化障碍(FAODs)的遗传疾病得到了体现。FAODs是一类脂肪酸运输和氧化缺陷的异质性疾病群,以常染色体隐性遗传方式传递,临床表现范围广泛。此外,证据表明,胎儿发育期间对FAO活性的调节不仅对胎儿生命至关重要,而且对成年期的健康和疾病也有影响。因此,FAO活性的测量为许多疾病的病理生理和代谢基础提供了有价值的见解。Assay Genie的非放射性FAO检测试剂盒基于底物辛酰辅酶A的氧化反应。产生的NADH与还原反应产生的四唑盐INT结合形成甲瓒。甲醛产物在492nm处表现出最大吸收,因此甲瓒的吸收强度与增加的FAO活性成正比。

货号BR00001
名称Fatty Acid Oxidation Assay 脂肪酸氧化检测试剂盒
规格48 assays
样本细胞裂解液,组织裂解液
研究领域对健康和病理状态下的代谢途径和过程进行研究(脂质代谢)。 研究信号转导途径; 研究遗传性疾病,例如脂肪酸氧化障碍(FAODs); 研究心血管疾病,例如心力衰竭; 研究胎儿发育期间的细胞能量代谢; 研究脂肪酸氧化在癌症代谢中的意义。

 

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图3. 脂肪酸氧化检测:从健康仓鼠心脏和与心力衰竭相关的TO2仓鼠模型心脏制备组织裂解物。裂解物被用于测定,脂肪酸氧化水平被量化。


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图4. 脂肪酸氧化试检测原理:辛烷酰辅酶a是底物,而不是反应的产物。   


除了脂肪酸摄取和脂肪酸氧化检测试剂盒,Assay Genie的游离脂肪酸检测试剂盒提供了一个简单的,一步和高通量测定游离脂肪酸。在这个实验中,游离脂肪酸被酶转化为酰基辅酶a,随后转化为H2O2。所得的H2O2与特定的染料反应形成粉红色的产物。570nm处的光密度或荧光强度(530/585 nm)与样品中游离脂肪酸浓度成正比。

BA0101.png

货号BA0101
名称Free Fatty Acid Measurement Kit 游离脂肪酸检测试剂盒
规格100 assays
样本血清,血浆,尿液,唾液,牛奶,细胞培养,食品
应用用于脂肪酸的定量测定及药物对其代谢作用的评价


Assay Genie是一家来自爱尔兰的生物科研试剂供应商,可提供超过180000种产品,产品种类丰富。公司主要有三条产品线:ELISA Genie,Assay Genie,Antibody Genie 。旗下涵盖了15种种属的高品质的ELISA试剂盒及多种抗体,可检测的指标种类丰富,覆盖免疫、代谢和分子等多种研究领域,是科学研究中便捷的小助手。


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